Lupita Amondi Nyong’o blev født i Mexico, men opvoksede i Kenya. Hun tog sin uddannelse i USA, hvor hun studerede på Yale University School of Drama.

Hendes debut som skuespiller var i 2008, da hun medvirkede i kortfilmen 'East River'

I 2013 fik hun sin første rolle i en spillefilm i det historiske-drama 12 Years a Slave, som er instrueret af Steve McQueen. Her havde hun birollen som slaven Patsey. Rollen blev Nyong’os internationale gennembrud, og indbragte hende en oscar for bedste kvindelige birolle.

I fremtiden vil Lupita medvirke i film som The Jungle Book, hvor hun lægger stemme til ulvemoderen Rakcha, og i Star Wars: Episode VII.