Den amerikanske skuespillerinde studerede oprindeligt ballet i New York men skiftede karriere til skuespil. Hun fik sin første rolle i NBC miniserien 'Lucky Chances' i 1990.

Elisabeth Moss medvirkede i 'Girl Interrupted' overfor Winona Ryder, hvor hun spillede Polly, der lider af skizofreni. Hendes gennembrud skete dog først i 2007, hvor hun fik rollen som Don Drapers sekretær Peggy i 'Mad Men'. Det blev til 11 år som Peggy og en Golden Globe-nominering for 'bedste skuespillerinde i en TV-serie - drama' i 2011.

Moss hidtil største rolle landede hun i HBO serien 'The Handmaiden's Tale' i 2017 som tjenesterinden Offred, hvor hun kæmper mod systemet i Gilead. Hun har modtaget en Golden Globe-pris for rollen som Offred.